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ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉(cāng)鼠ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基和生物試劑等

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小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒范圍

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒范圍
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采購(gòu)度:156    原產(chǎn)地:美洲

發(fā)布時(shí)間:2018/3/7 15:39:21

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒范圍用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)的含量。

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詳細(xì)信息
 
 小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)elisa試劑盒范圍

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)的含量。
有效期:6個(gè)月
保存條件:2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒范圍準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等裂解產(chǎn)物盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成16000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液200ul。在管中加入16000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?00ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

標(biāo)本激活方法
1. 將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。
2. 加20ul 1 N HCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60± 2分鐘。
3. 加20ul 1 N NaOH,蓋緊,上下混勻。
4. 即用,或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本HSP60的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)
5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。

改良雙抗體夾心法
本法是雙抗體夾心法的一種改良形式,也是用于測(cè)定抗原的,其原理可用圖來(lái)表示。本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體,經(jīng)洗滌加入含有欲測(cè)抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標(biāo)記的特異性抗體b,而這次加入的抗體b于次包被于固相載體上的特異性抗體a對(duì)被測(cè)抗原來(lái)說(shuō)都是特異性的,但不是用同種動(dòng)物免疫制備的,否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后,再加酶標(biāo)記抗b抗體,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進(jìn)行測(cè)定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此,放大的倍數(shù)更高,故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時(shí)避免標(biāo)記特異性抗體,而另一優(yōu)點(diǎn)是只要標(biāo)記一種抗抗體,即可達(dá)到多種應(yīng)用。

檢測(cè)程序
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線(xiàn)圖上查出相應(yīng)HSP60含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度:*小的HSP60 檢測(cè)濃度小于65pg/ml。
2. 特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人HSP60。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于12%。

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒范圍注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!


更新時(shí)間:2024/12/9 9:53:57

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