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點(diǎn)擊次數(shù):12619 發(fā)布時(shí)間:2022/5/9 10:13:53
1、花板的原因大多在在樣本
花板,就是空白、陰陽性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控空結(jié)果正常,而樣本孔 OD 值偏高。之所以空白、對(duì)照及質(zhì)控孔的結(jié)果正常而樣本孔的結(jié)果異常,是因?yàn)闃颖颈旧淼脑�,大部分或者全部的樣本孔�?nbsp;OD 值偏高,很可能是因?yàn)闃悠分心承┕灿械奈镔|(zhì)非特異性的吸附于固相載體,而在實(shí)驗(yàn)過程中并未除去。
2、洗滌的作用
聚苯烯因其具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能而被廣泛用于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的固相載體,聚苯烯塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附作用是具有普遍性,因此需要通過洗滌排除在實(shí)驗(yàn)過程中的非特異性地吸附在固相載體上的干擾物質(zhì)。
3、孵育時(shí)間過長(zhǎng)也會(huì)造成花板現(xiàn)象
樣本過多會(huì)導(dǎo)致樣本在室溫停留時(shí)間增多,進(jìn)而加長(zhǎng)了孵育的時(shí)間,蛋白質(zhì)非特異性吸附于固相載體。
為了避免“花板”問題的出現(xiàn),降低檢測(cè)的假陽性率,獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在檢測(cè)過程中應(yīng)采取下列措施:
1.在選擇ELISA試劑時(shí),應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時(shí)的試劑,如恒遠(yuǎn)生物高敏elisa試劑盒。
2.在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
3.血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測(cè)或讓血液過夜后再檢測(cè)。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至低。
4.檢測(cè)加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長(zhǎng)時(shí)間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清分離。
5.加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6.對(duì)于血清中存在的紅細(xì)胞或纖維蛋白原,可以在加樣離心時(shí)得到控制,同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時(shí)間來減輕或避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同樣,對(duì)于血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數(shù)和延長(zhǎng)浸泡時(shí)間也同樣有效。
7.封板溫育時(shí),各孔定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
8.孵育時(shí)間過長(zhǎng),增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會(huì)造成“花板”。因此,除把握孵育時(shí)間外,在加樣過程中也應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間,標(biāo)本較多時(shí)可分批操作。
9.手工洗板時(shí)應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。
10. 用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
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