支原體ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍: 96T
2 ng/L -48 ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定細(xì)胞中支原體( Mycoplasmal)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中支原體( Mycoplasmal)水平。用純化的支原體(Mycoplasmal)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入支原體(Mycoplasmal),再與 HRP標(biāo)記的支原體( Mycoplasmal)抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的支原體( Mycoplasmal)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中支原體(Mycoplasmal)濃度。 試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | | 0.5ml×1瓶 | 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔 × 8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 | 5 | 顯色劑 A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 | 6 | 顯色劑 B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) | |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品*終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止
48 ng/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 24 ng/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 12 ng/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6 ng/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 3 ng/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | |
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
支原體ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期: 6個(gè)月
上海恒遠(yuǎn)現(xiàn)貨供應(yīng)進(jìn)口 支原體ELISA試劑盒 48次 1200,96次2200元,歡迎您來電咨詢訂購。
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司