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斑馬魚(yú)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)

點(diǎn)擊次數(shù):12181   發(fā)布時(shí)間:2023/11/1 10:25:17

AGES就是糖基化終末產(chǎn)物的英文簡(jiǎn)寫,它是非酶糖基化反應(yīng)(Maillard反應(yīng))的終末產(chǎn)物。是指蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子在沒(méi)有酶參與的條件下,自發(fā)的與葡萄糖或其他還原單糖反應(yīng)所生成的穩(wěn)定的共價(jià)加成物。本試劑盒用于測(cè)定斑馬魚(yú)血清,血漿及相關(guān)液體樣本中晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)含量。那么在ELISA實(shí)驗(yàn)中有哪些注意事項(xiàng)呢,恒遠(yuǎn)生物小編為大家總結(jié)ELISA實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)。

一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中斑馬魚(yú)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平。用純化的斑馬魚(yú)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs),再與HRP標(biāo)記的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中斑馬魚(yú)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)濃度。 

二、標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

三、注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

完整版說(shuō)明書(shū)可咨詢業(yè)務(wù)員獲取哦,恒遠(yuǎn)生物擁有一批技術(shù)精湛、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)工程師,經(jīng)過(guò)多年積累,試劑盒現(xiàn)已涵蓋種屬甚多,上千余種指標(biāo),有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn),迎合了廣大高校和科研人員的需求,提高了科研人員的工作效率,成熟穩(wěn)定的質(zhì)量,完善的庫(kù)存及供應(yīng)體系以及穩(wěn)定的技術(shù)指導(dǎo),產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。期待您的咨詢。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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