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恒遠(yuǎn)生物|無血清培養(yǎng)基的好處和壞處都有哪些?

點(diǎn)擊次數(shù):12281   發(fā)布時(shí)間:2023/8/15 15:21:43

無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,和傳統(tǒng)的培養(yǎng)基不一樣的是,它既能滿足細(xì)胞在體外長時(shí)間培養(yǎng)的要求,也能避免動(dòng)物血清中所帶來的不利因素。無血清培養(yǎng)基的發(fā)展歷程分為無血清培養(yǎng)基、無動(dòng)物源培養(yǎng)基、無蛋白培養(yǎng)基及化學(xué)成分限定培養(yǎng)基四類。在使用無血清培養(yǎng)基時(shí),有些細(xì)胞需要逐漸適應(yīng),即先將原來的培養(yǎng)基與無血清培養(yǎng)基混合培養(yǎng),再轉(zhuǎn)為完整的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。有些貼壁生長的細(xì)胞,復(fù)蘇時(shí)也可用少量的血清先培養(yǎng)(血清可以幫助細(xì)胞貼壁),然后再轉(zhuǎn)為無血清培養(yǎng)基。

無血清培養(yǎng)基由營養(yǎng)較wan全的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和補(bǔ)充因子組成:

一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基
在不同細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),根據(jù)細(xì)胞需求對成分已知的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整即可使細(xì)胞更好地生長并提高目的產(chǎn)物的表達(dá)量。大多數(shù)人工合成的培養(yǎng)基如DMEM、DMEM/F12、1640。

二、補(bǔ)充因子
補(bǔ)充因子是代替血清的各種因子的總稱,大部分的無血清培養(yǎng)液必須要補(bǔ)加3-8種因子,像胰島素、亞硒suan鈉和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補(bǔ)充因子,其他多數(shù)為輔助作用的因子。

補(bǔ)充因子的功能不同可分為五類:

1.激素和生長因子
很多細(xì)胞用無血清培養(yǎng)時(shí)需要加入激素,如胰島素、生長激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細(xì)胞存活因子,與細(xì)胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進(jìn)RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成,抑制細(xì)胞凋亡。(雌二醇、孕酮等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補(bǔ)充因子)

2.結(jié)合蛋白
常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細(xì)胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、金屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無血清培養(yǎng)基中活性的作用。(牛血清白蛋白添加的量一般比較大,增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞不受機(jī)械損傷)

3.貼壁因子
許多細(xì)胞一定要貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展的因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),(如纖粘連蛋白、膠原蛋白等)它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對許多細(xì)胞的繁殖和分化起著重要的作用。纖粘連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞、CHO細(xì)胞等。

4.酶抑制劑
培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中必不可少須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。(常用的是大豆胰酶抑制劑)

5.其他補(bǔ)充因子。
一些細(xì)胞培養(yǎng)使用的無血清培養(yǎng)基還需要補(bǔ)充微量元素、維生素、脂類等低分子量物質(zhì)。

無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn):
1)避免血清不同批次間的質(zhì)量差異,提高細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性。
2)避免血清對細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染。
3)避免血清組分對實(shí)驗(yàn)研究的影響。
4)有利于體外培養(yǎng)細(xì)胞的分化。
5)可提高目的蛋白的表達(dá)量并使產(chǎn)品易于分離純化。
6)組分穩(wěn)定,可大量生產(chǎn)。
7)不含有絲分裂原抑制劑,可以促進(jìn)細(xì)胞增殖。

無血清培養(yǎng)基的缺點(diǎn)
1)細(xì)胞易受某些機(jī)械和化學(xué)因素的影響,培養(yǎng)基沒有傳統(tǒng)合成培養(yǎng)基方便。
2)成本高。
3)針對性強(qiáng),一種無血清培養(yǎng)基僅適合某一類細(xì)胞的培養(yǎng)。
4)不同細(xì)胞對培養(yǎng)及營養(yǎng)成分的需求不同。
5)雖然不添加動(dòng)物血清,但為了細(xì)胞的生長,培養(yǎng)基中依然包含大量動(dòng)植物來源蛋白,添加物質(zhì)的化學(xué)成分也不夠明確。

三、生產(chǎn)生物制品
目,生產(chǎn)生物活性蛋白、疫苗、單克隆抗體和基因治療藥物的表達(dá)載體等生物制品時(shí)一般都采用可高密度生長的動(dòng)物工程細(xì)胞。無血清培養(yǎng)技術(shù)的運(yùn)用,給動(dòng)物工程細(xì)胞提供了更優(yōu)的條件,進(jìn)而表達(dá)更多的目的產(chǎn)物,并有利于后續(xù)目的產(chǎn)物的分離和純化。

四、基礎(chǔ)研究域
雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的wan全培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對有些實(shí)驗(yàn)卻不適合。
【如,在利用DC腫瘤疫苗治療時(shí),所需要的樹突狀細(xì)胞和用于抗原致敏的腫瘤細(xì)胞,往往在胎牛血清中進(jìn)行培養(yǎng),這就很難分辨哪些免疫反應(yīng)是由血清引起的而不是真正的先天免疫系統(tǒng)的作用,需要使用成分明確的無血清培養(yǎng)基排除動(dòng)物血清的干擾�!�

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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