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點(diǎn)擊次數(shù):13353 發(fā)布時(shí)間:2012/7/12 17:03:41
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。
以下是elisa試劑盒的操作步驟
方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
主要代理產(chǎn)品:
試劑盒:ELISA試劑盒、檢測(cè)試劑盒、免疫組化試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、金標(biāo)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒、生化試劑盒等。
各種動(dòng)物血清:內(nèi)皮細(xì)胞專用血清、國(guó)產(chǎn)血清、GIBCO胎牛血清等。
抗體:進(jìn)口原裝抗體、進(jìn)口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標(biāo)抗體、雙標(biāo)抗體、多標(biāo)抗體、一抗、二抗;免疫組化抗體、免疫熒光抗體、流式細(xì)胞抗體、免疫細(xì)胞化學(xué)抗體等。
細(xì)胞:原裝進(jìn)口細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞等。
培養(yǎng)基:顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌培養(yǎng)基、干燥培養(yǎng)基、其它菌檢測(cè)培養(yǎng)基等等。
公司名稱:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
電話:021-60517348
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