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恒遠(yuǎn)生物|細(xì)菌和真菌的DNA如何提取呢?

點(diǎn)擊次數(shù):12285   發(fā)布時(shí)間:2023/6/28 17:41:43

 操作步驟:

1. 準(zhǔn)備:無水乙醇、異丙醇、PBS 及 1.5mL 離心管。

2. 取出洗滌液,按終濃度 70%比例加入無水乙醇,如7.8mL 加入18.2mL 無水乙醇,充分混勻。

3. 菌體處理:將收集的細(xì)菌或真菌 5,000 rpm 離心3分鐘,棄上清,加入 200μLPBS,振蕩混勻,5,000 rpm 離心3分鐘,充分棄上清。

4. 加入100 μL 裂解液Ⅰ,強(qiáng)烈 Vortex,直到沉淀懸浮,無明顯塊狀沉淀,再加入裂解酶 10μL,充分混勻,室溫放置 20 分鐘。

5. 加入200 μL 裂解液Ⅱ,20μL 復(fù)合消化液,充分混勻,65℃孵育 20 分鐘。

6. 加入450μL 異丙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響 DNA 的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

7. 將吸附柱放入收集管內(nèi),將上述溶液全部轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi),12,000 rpm 離心1分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。

8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液至吸附柱內(nèi),靜置 2 分鐘,12,000 rpm 離心 1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。

9. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 離心 1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。同時(shí),按每份樣本 40μL 取洗脫液(如 10 份提取樣本,即取 400μL 洗脫液),放置于滅菌 1.5mL 離心管,65℃預(yù)熱。

10. 將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000rpm 離心 2 分鐘,離去殘留的洗滌液。

11. 取出吸附柱,放入新的 1.5mL離心管內(nèi),加入上述預(yù)熱的40μL 洗脫液,靜置 2 分鐘,12,000rpm離心 2 分鐘,收集 DNA 溶液。提取的 DNA 即可用于下一步實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。

注意事項(xiàng):

1. 裂解液、洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì),操作過程請做好防護(hù)措施,避免直接接觸皮膚,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛,請立即用清水或生理鹽水沖洗,必要時(shí)請就醫(yī)。

2. 洗滌液盡量現(xiàn)用現(xiàn)配,按需計(jì)算用量后配制。加入乙醇后的洗滌液如使用不完,2-8℃密封保存不超過 1 周。

3. 細(xì)菌量建議不高于 10^7 。

針對(duì)以上技術(shù)資訊內(nèi)容,如果您有不太清楚或者了解更多信息(包括基本信息/技術(shù)資料/解決方案),都可以隨時(shí)聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員。我司提供的ELISA試劑盒種屬齊全,質(zhì)量有保障!提供全程技術(shù)指導(dǎo)及免費(fèi)代檢測服務(wù)。 

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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