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免疫學(xué)三大工具:IHC、ELISA和WB區(qū)別

點擊次數(shù):12534   發(fā)布時間:2023/2/7 10:56:04

在科研實驗技術(shù)方面,恒遠(yuǎn)生物為了幫助初學(xué)者快速上手,減少摸索苦惱,門為大家準(zhǔn)備了一套標(biāo)準(zhǔn)的實驗流程和技巧。檢測實驗樣本,ELISA、WB、IHC選哪個?看完這篇你就知道了。
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IHC:
IHC免疫組化抗原技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。
 
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗):
ELISA用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù),這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同,只是因為所檢測的樣品不同,從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析,其靈敏度非常高。
 
Western bolt: 
是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測。對已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測�?梢杂糜诙ㄐ院桶攵�。WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。
 
1.對于IHC來說,定位是免疫組化的優(yōu)勢
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高,是定位檢測分析方法對病理學(xué)域開展深入研究是十分有意義,尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。
 
2.WB與IHC技術(shù)相比,定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進(jìn)而間接反映它們的定位),但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。
 
3.ELISA與IHC相比,定量準(zhǔn)確,是分泌性蛋白檢測方法
尤其對于微定量分析多個樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結(jié)果準(zhǔn)確。IHC針對性比較強,而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本,而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性,一般不用于定量檢測。
 
4.WB和ELISA的區(qū)別
WB:可以看到特異性的條帶,但是定量比較煩
ELISA:可以直接讀出濃度,但是如果抗體有非特異性結(jié)合,那得到的數(shù)值就不可信。
WB:只能半定量,但是可以檢測細(xì)胞膜蛋白,這點elisa做不到
ELISA:可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響 
WB:所檢測的一般是抗原,而elisa抗原抗體都可以檢測。
 

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