原代細(xì)胞是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指:組織器官、外周血及胚胎等。由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的1代和傳代到10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。恒遠(yuǎn)生物為大家總結(jié)了原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程,一起來(lái)看看吧!
原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程:
1.整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,所有的器材要高壓消毒。
2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。
3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口,緩慢推動(dòng)注射器,隨著心臟的跳動(dòng),將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。
4.取出小鼠的肺部組織,將肺組織切成小米粒樣的大小,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。
5.將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,4度過(guò)夜,小鼠處理,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,消化4個(gè)小時(shí)。
6.消化4小時(shí)后,加入RPMI1640培養(yǎng)基(有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)10ml(添加培養(yǎng)基,可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量),繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。
7.24小時(shí)后,取出肺組織,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。
8.原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過(guò)程,一般需等到24小時(shí)后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的排列情況。
9.原代細(xì)胞2-3天換液一次,因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層時(shí),會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)接近單層時(shí)就可以傳代了,不要等到長(zhǎng)得非常滿。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司業(yè)供應(yīng)高品質(zhì)人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、豚鼠ELISA試劑盒、兔ELISA試劑盒、牛ELISA試劑盒等各種ELISA試劑盒及生物試劑、培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、血清等試驗(yàn)耗材!公司擁有自己的實(shí)驗(yàn)室,備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì),ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,實(shí)驗(yàn)提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),并提供精湛的技術(shù)服務(wù),歡迎咨詢選購(gòu)!
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司