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試劑盒檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)

點(diǎn)擊次數(shù):13498   發(fā)布時(shí)間:2013/6/3 9:51:00

elisa試劑盒檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)

操作步驟:
用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
   ↓   
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)
   ↓   
于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,   37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*后一遍用DDW洗滌。
   ↓
加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
     ↓
終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
     ↓
結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。


注:
1.
用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2.
每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,
該孔不加任何試劑,
只是*后加底物溶液及
2N
H2SO4
。
測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)
OD
值至零。
3.
為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4.
未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于
2-8
℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過
氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、

物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5.
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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