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點(diǎn)擊次數(shù):13303 發(fā)布時(shí)間:2013/3/18 10:07:03
我從別處要到一株含有自殺質(zhì)粒的大腸桿菌,現(xiàn)在提取了自殺質(zhì)粒后和目的片段連接,連接后的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化含有自殺質(zhì)粒的大腸桿菌,是否會(huì)有質(zhì)粒的相容性,如果有,我連接后的質(zhì)粒丟失,還是根本就轉(zhuǎn)不進(jìn)去?
沒(méi)有必要再轉(zhuǎn)到含有自殺質(zhì)粒的細(xì)菌中了。你構(gòu)建的含有同源片段的重組質(zhì)粒本來(lái)就具有自殺質(zhì)粒的功能,轉(zhuǎn)到?jīng)]有自殺載體的細(xì)菌中,其同樣能夠進(jìn)行敲除或失活目的基因。另外,如果你有其他特殊目的,實(shí)在要轉(zhuǎn)到含有自殺載體的細(xì)菌里的話,那你可在你重建的質(zhì)粒上添加一個(gè)不同的抗性基因,這樣就可以通過(guò)添加抗生素防止質(zhì)粒丟失了。還有質(zhì)粒的不相容性是一個(gè)緩慢的過(guò)程,一般需要幾代或幾十代或更長(zhǎng)的細(xì)菌繁殖周期,你做自殺載體的話肯定不需要他長(zhǎng)時(shí)間(一般發(fā)酵生產(chǎn)需要)存留的,只要目的基因整合到基因組上面就可以了。
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