国产裸体歌舞一区二区_亚洲熟妇丰满多毛xxxx_一本一道久久综合狠狠老_久久久精品一区aaa片_一本一道av无码中文字幕麻豆

主營產(chǎn)品:

ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基和生物試劑等

18221656311

聯(lián)系我們/CONTACT US

聯(lián)系人:錢經(jīng)理

電 話:18221656311

手 機(jī):18221656311

地 址:上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座

郵 編:200093

傳 真:021-64881400

郵 箱:[email protected]

阿儀網(wǎng)商鋪:http://www.app17.com/c58469/

手機(jī)網(wǎng)站:m.hybiosh.com

產(chǎn)品分類/CLASS

ELISA試劑盒

酶聯(lián)免疫試劑盒

人ELISA試劑盒

進(jìn)口血清

抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

Sigma試劑

Amresco試劑

食品檢測(cè)試劑盒

Spectrum試劑

免疫化學(xué)產(chǎn)品

其他方法測(cè)試盒

金標(biāo)試劑盒

放免試劑盒

代理品牌

技術(shù)文章ARTICLE

細(xì)胞轉(zhuǎn)染你真的了解嗎?

點(diǎn)擊次數(shù):12542   發(fā)布時(shí)間:2022/10/9 10:52:59

 一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等。

1.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后 24-72 h 內(nèi)分析結(jié)果,常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。

2.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在。盡管線性 DNA 比超螺旋 DNA 轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色體中概率很小,通常需要一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。

主要有下面幾種方法:化學(xué)法:磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質(zhì)體法;物理法:電穿孔法、顯微注射法、biolistic 顆粒傳遞法;病毒介導(dǎo)法:逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒。

A. 陽離子脂質(zhì)體法:帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。

特點(diǎn):簡單通用,適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清,轉(zhuǎn)染效率隨細(xì)胞類型變化大。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞,所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高。懸浮細(xì)胞建議使用電穿孔法。

B. 電穿孔法:利用高壓電脈沖對(duì)細(xì)胞膜的干擾,使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔。

C. 逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA):通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)合成 DNA 并隨機(jī)整合到宿主基因組中。

特點(diǎn):穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大。

D. 腺病毒(雙鏈 DNA):先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,繼而在αV 整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞。

特點(diǎn):可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

二、影響轉(zhuǎn)染的因素:血清 血清影響復(fù)合物的形成,降低轉(zhuǎn)染效率

陽離子脂質(zhì)體和 DNA 量在使用血清時(shí)會(huì)有所不同,因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康,對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞,可以使用 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基。對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞,建議使用 LIPOFECTAMINE 2000。

1.抗生素

比如青霉素和鏈霉素,是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒,但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。

2.細(xì)胞代數(shù)

轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)過 1-2 次傳代細(xì)胞生長旺盛容易轉(zhuǎn)染,注意貼壁細(xì)胞一旦長滿就不好轉(zhuǎn)染。

3.細(xì)胞鋪板密度

一般轉(zhuǎn)染時(shí),貼壁細(xì)胞密度為 70%-90%,懸浮細(xì)胞密度為 2*10^6--4*10^6 細(xì)胞/ml 時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。

4.DNA 質(zhì)量

DNA 質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理,如果 DNA 不純,如帶少量的鹽離子,蛋白,代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。


原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

TOP

掃一掃,關(guān)注我們!

首 頁| 公司介紹| 產(chǎn)品展示| 公司新聞| 技術(shù)文章| 聯(lián)系我們| 客戶留言

阿儀網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作,未經(jīng)允許翻錄必究. 聯(lián)系人:錢經(jīng)理 聯(lián)系電話:18221656311 ICP備案號(hào):滬ICP備11004148號(hào)-11 總訪問量:7916207 管理登錄

主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基和生物試劑等

14

阿儀網(wǎng)推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站

聯(lián)系方式

18221656311
13296034073

工作時(shí)間

(9:00-18:00)